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Background/Aims: Peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-γ ligand is known to inhibit the growth of several kinds of cancer cells, yet its effect on cholangiocarcinoma is indecisive. We investigated the effect of an endogenous ligand of PPAR-γ, 15-deoxy-δ (12,14)-prostaglandin J2 (15-deoxy-PGJ2) on cholangiocarcinoma cells that were established from intrahepatic cholangiocarcinoma tissue of Korean patients. Methods: Four cholangiocarcinoma cell lines, Cho-CK, Choi-CK, JCK and SCK, were studied. The mRNA expression of PPAR-γ, bcl-2, and bax were examined by RT-PCR. Cell viability was determined by MTT assay. The cell cycle was analyzed by flow cytometry, and apoptosis by cell death detection ELISA kit. Caspase activity was measured by colorimetric assay. The effect of caspase inhibitors on 15-deoxy-PGJ2-induced apoptosis was determined by measuring cell viability using the MTT assay. Results: PPAR-γ mRNA was expressed in all cholangiocarcinoma cells. 15-deoxy-PGJ2 inhibited proliferation of all cells in a dose- and time-dependent manner. All cells treated with 15-deoxy-PGJ2 showed increased dose-dependent apoptosis. Caspase 3 was activated in all cells and caspase 9 was activated in all but JCK cells after 15-deoxy-PGJ2 treatment. Caspase 8 activity showed no significant change. The pan-caspase inhibitor, Z-VAD-FMK, and the caspase-3 inhibitor, Z-DEVD-FMK, blocked 15-deoxy-PGJ2-induced apoptosis in all cells dose-dependently. The expression of bcl-2 was decreased in Cho-CK, Choi-CK and SCK cells, and bax expression was not changed significantly after 15-deoxy-PGJ2 treatment. Conclusions: PPAR-γ mRNA was expressed in all Korean cholangiocarcinoma cells. Our data suggest that 15-deoxy-PGJ2 exerts an antineoplastic effect against cholangiocarcinoma cells by inducing apoptosis through caspase activation.


목적: PPAR gamma 배위자의 항암 효과는 다양한 암세포에서 보고되었으나 담관암에 대한 연구는 부족한 실정이다. 본 연구에서는 한국인 간내담관암에서 확립한 암세포주를 대상으로 내인성 PPAR gamma 배위자인 15-deoxy-PGJ2의 항암 효과와 그 기전에 관하여 알아보았다. 방법: Cho-CK, Choi-CK, JCK, SCK의 네 가지 간내담관암세포주를 사용하였다. RT-PCR 방법으로 PPAR gamma, bcl-2, bax 각 유전자의 mRNA 발현을 측정하였다. 세포증식 분석은 MTT assay, 세포주기 분석은 flow cytometry, 세포자멸사 분석은 cell death detection ELISAplus kit를 사용하였다. 또한 Caspase 활성도 측정을 위해 caspase colorimetric assay kit를 사용하였고, MTT assay를 통해서 caspase 억제제가 15- deoxy-PGJ2의 암세포증식 억제를 차단하는지 알아보았다. 결과: 모든 담관암세포주에서 PPAR gamma mRNA가 발현 되었다. 15-deoxy-PGJ2를 5, 10, 25, 50, 100 mM 농도로 투여하여 72시간 배양하였을 때 모든 세포주에서 용량 및 시간 의존적으로 세포증식이 억제되었다. 세포주기 분석 결과 25 mM 15-deoxy-PGJ2 투여 48시간 후 모든 세포주에서 세포자멸사 분획이 증가하였으며 세포자멸사 유도 효과는 용량 의존적이었다. 25 mM 15-deoxy-PGJ2를 투여한 후 48시간까지 caspase 활성도를 측정하였는데, caspase 3 활성도는 모든 세포주에서 caspase 9 활성도는 JCK를 제외한 나머지 세포주에서 유의하게 증가하였으며 caspase 8 활성도는 별 변화가 없었다. Pancaspase 억제제인 Z-VAD-FMK와 caspase-3 억제제인 Z-DEVD-FMK를 투여한 경우 15-deoxy- PGJ2의 암세포증식 억제 효과가 48시간 이후 농도 의존적으로 차단되었으며, 이러한 효과는 모든 세포주에서 나타났다. 각 세포주에 15-deoxy-PGJ2를 투여 한 후 48시간까지 bcl-2 및 bax gene의 발현 유무를 관찰하였는데, bcl-2 mRNA는 Cho-CK, Choi-CK, SCK 세포 주에서 유의하게 감소하였으나 bax의 경우 모든 세포주에서 유의한 변화를 보이지 않았다. 결론: 한국인 간내담관암세포주 모두에서 PPAR gamma mRNA가 발현됨을 알 수 있었고, 내인성 PPAR gamma 배위자인 15-deoxy-PGJ2가 세포자멸사 유도를 통해 담관암세포 증식을 용량 및 시간 의존적으로 억제하였다.