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Akt/PKB는 세포의 증식, 분화, 사멸, 혈관신생 등 매우 많은 생리활성 조절에 있어 매우 중요한 역할을 수행한다. 우리는 Akt/PKB의 tyrosine 잔기의 인산화가 Thr308의 인산화에 필수적임을 밝혔다. COS-7 세포주에 EGF를 처리하면 Akt/PKB의 tyrosine 잔기에 인산화가 촉진되었으며 이러한 인산화 촉진은 Akt/PKB에 myristoylation site를 이용해 세포막으로 이동시키면 더욱 더 증가하였다. 특히, 분리된 Akt/PKB와 EGF 수용체를 이용해 인산화 반응을 실시하면 tyrosine 잔기의 인산화뿐만 아니라 Ser473에 대한 인산화도 증가하였다. 더욱이 tyrosine 잔기에 인산화 된 Akt/PKB는 활성화된 EGF 수용체와 직접적인 결합을 이루고 있음을 확인하였다. 마지막으로 예측되는 tyrosine 잔기인 Tyr326을 Alanine으로 치환하면 정상 Akt/PKB뿐만 아니라 활성화된 Akt/PKB의 EGF에 의한 Thr308 인산화가 사라짐을 확인하였다. 이러한 결과들을 바탕으로 EGF 수용체에 의한 직접적인 Akt/PKB의 tyrosine 인산화는 EGF에 의한 많은 생리활성 조절기전의 또 다른 기전이라 볼 수 있다.


Akt/PKB plays pivotal roles in many physiological responses such as proliferation, differentiation, apoptosis, and angiogenesis. Here we show that tyrosine phosphorylation of Akt/PKB is essential for the subsequent phosphorylation at Thr308. Tyrosine phosphorylation of Akt/PKB was induced by stimulation of COS-7 cells with epidermal growth factor receptor (EGF) and its phosphorylation was significantly enhanced by constitutive targeting of Akt/PKB to the plasma membrane by myristoylation. Interestingly, incubation of affinity purified Myc-tagged Akt/PKB with purified EGF receptor resulted in tyrosine phosphorylation as well as Ser473 phosphorylation of Akt/PKB. In addition, tyrosine-phosphorylated Akt/PKB could directly associate with activated EGF receptor in vitro. Finally, alanine mutation at putative tyrosine phosphorylation site (Tyr326) abolished EGF induced Thr308 phosphorylation of wild type as well as constitutively active form of Akt/PKB. Given these results we suggest here that direct tyrosine phosphorylation of Akt/PKB by EGF receptor could be another mechanism of EGF-induced control of many physiological responses.