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DEAE-sephadex ion exchange column chromatography에 의해 Xylogone sp. 유래 β-mannanase를 분리정제한 결과 비활성 20.39 units/ml, 정제배율 84.95을 나타내었다. SDS-PAGE에 의한 단일밴드를 확인하였고, 분자량은 34 kDa으로 결정되었다. 정제효소에 의해 guar gaum galactomannan을 가수분해하여 activated carbon column chromatography에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC에 의해 주요 당가수분해물을 분석한 결과 중합도 4와 6으로 확인되었다. 분리된 올리고당의 구조식은 Methylation법에 의해 M-M-M-M 및 M-M-M-M-M-G (G- and M- represent α-1,6-D-galactosidic and β-1,4-mannosidic linkages)로 확인되었다. B. longum, B. bifidum, B. infantis, B. adolescentis, B. animalis 및 B. breve의 생육활성에 대한 중합도 4와 6의 영향을 검토하기 위하여 변형 MRS 배지 상에 탄소원으로 중합도 4와 6을 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 hetero type인 중합도 6 galactomannooligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 Standard MRS와 비교하여 7.33배의 상대 활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타내었다. B. bifidum의 경우에서도 중합도 6에서 5.74배, 이외에도 B. breve, 에 있어서 3.42배의 상대 활성을 나타내었으나, homo type인 중합도 4의 경우는 생육활성에 기여하지 못하였으며 오히려 B. infantis 와 B. adolescentis에 대해서는 활성이 크게 감소하였다.


Xylogone sp. β-mannanase was purified by DEAE-sephadex ion exchange column chromatography. The purified β-mannanase exhibited maximum activity at pH 6.0 and 60oC. Copra cake galactomannan was hydrolyzed by the purified β-mannanase, and then hydrolysates separated by activated carbon column chromatography. The main hydrolysates were composed of D.P(Degree of Polymerization) 4 and 6 galactomannooligosaccharides by TLC method. For elucidate the structure of D.P 4 and 6 oligosaccharudes, methylation analysis was performed. D.P 4 and 6 were identified as M-M-M-M and M-M-M-M-M-G(G- and M- represent α-1,6-D-galactosidic and β-1,4-mannosidic linkages). To investigate the effects of copra cake galactomannooligosaccharides on the in vitro growth of B. longum, B. bifidum, B. infantis, B. adolescentis, B. animalis, and B. breve, Bifidobacterium spp. were cultivated individually on the modified-MRS medium containing carbon source such as D.P 4 and 6 galactomannooligosacchariodes, respectively. B. longum grew up 7.33-fold more effectively by the replacement of D.P 6 galactomannooligosaccharides as the carbon source in a comparasion of standard MRS. Also, B. bifidum and B. breve grew up 5.74 and 3.42-fold slightly by the treatment of D.P 6 galactomannooligosaccharide.